参数信息
试剂名称:ROSGreenTM H2O2 Probe 过氧化氢荧光探针
规格:1mg
纯度:≥95%
储存条件:-20℃避光干燥
生产厂商:西安强化生物科技
使用方法
1、储存液制备
将低温保存的产品从冰箱取出,置于室温回温至少20min。低速离心3-5min。之后往瓶内加入无水DMSO充分溶解配成2~5mM储存液。
(比如,1mg ROSGreenTM H2O2 Probe加入333μl DMSO,溶解混匀后即得到5mM储存液)。按照单次用量分装冻存,避免反复冻融,至少3个月稳定。
2、工作液准备
正式实验前,或取粉末按照【储存液制备】用DMSO溶解,或于室温融化一管DMSO储存液。
(1)对于溶液H2O2测定,按照2~20μM工作液浓度制备2×工作液,用20mM Hepes缓冲液或其他缓冲液(pH 7.0)稀释储存液。工作液现配现用。
建议使用5μM终浓度的ROSGreenTM H2O2 Probe,测定溶液体系中H2O2浓度。
(2)对于细胞H2O2测定,按照2~20μM工作液浓度制备1×工作液,用含20mM Hepes缓冲液的HBSS,pH 7.0 或PBS稀释储存液。工作液现配现用。
3、 上清液H2O2测定
【以下为溶液H2O2测定的步骤,用作参考,请根据具体需求做调整。】
(1)于96孔板,加50μl 2×ROSGreenTMH2O2Probe工作液到每个孔(H2O2标准、空白对照、待测样本)内使总的测定体积为100μl/孔。
(2)室温避光孵育反应体系15~60min。
(3)荧光酶标板内监测用荧光增强,Ex/Em=490/525nm。
(4)空白孔(只含有反应缓冲液)的荧光用作对照,其他孔的荧光值需减掉空白对照孔荧光。
注意事项
(1)本品的DMSO储存液需分装成单次用量后,-20ºC避光保存,避免反复冻融。所有工作液现配现用。
(2)整个操作过程中注意避光。
(3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。