简要介绍
DASPEI是一种苯乙烯染料,用于活细胞的线粒体染色。
DASPEI具有较大的荧光斯托克斯位移,用作膜电位探针时被摄取速度相对较慢。
体内外DASPEI可用来鉴定几种不同类型的表皮细胞,包括真骨鱼内的表皮电感受器、机械刺激感受器和氯细胞,以及两栖动物的机械刺激感受器。
DASPEI能用来标记斑马鱼幼虫的毛细胞。
物理性质
【英文名称】:2-[4-(Dimethylamino)styryl]-1-ethylpyridinium iodide
【CAS NO】:3785-01-1
【分子式】:C17H21IN2
【分子量】:380.27
【熔点】:267 °C
【状态】:橙色固体
【Ex/Em】:461/589nm
【溶解性】:溶于DMSO
【纯度】:≥95%
【储存条件】:-20℃避光干燥
使用方法
1.DASPEI 工作液的配制
(1)制备储存液
用 DMSO 配制 10 mM 的 DASPEI
注:DASPEI 储存液建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存。
(2)工作液的配制
用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液,配制成 5-10 μM 的 DASPEI 工作液。
注:请根据实际情况调整 DASPEI 工作液浓度,且现用现配。
2. 细胞染色 (悬浮细胞)
(1)离心收集细胞,加入 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。细胞密度在1×106/mL。
(2)加入 1 mL DASPEI 工作液,室温孵育 30-60 分钟。
(3)400 g,离心 3-4 分钟,弃去上清。
(4)加入 PBS 洗涤细胞两次,每次 5 分钟。
(5)用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后,使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。
3. 细胞染色 (贴壁细胞)
(1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
(2)从培养基中移出盖玻片,吸除多余培养基。
(3)加入 100 μL 染料工作液,轻轻晃动使其完全覆盖细胞,孵育30-60 分钟。
(4)吸去染料工作液,用培养基洗 2-3 次,每次 5 分钟,使用荧光显微镜进行观察。
注意事项
荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
浓度控制可能存在影响,需尝试测试不同浓度;实验设计建议设置空白对照及膜电位干扰对照。