简要描述
CFDA-SE,是一种稳定的、细胞膜渗透性的非荧光染料,由两个醋酸 基团和一个琥珀酰亚胺酯(SE)官能团组成的一个荧光分子。
该染料进入细胞后主要定位于细胞膜、细胞质和细胞核,在细胞核的染色效果较强。
CFDA-SE 染料可用于检测细胞增殖,CFDA-SE 可随着细胞的分裂增殖而被子代细胞均匀继承,其含量的衰减与细胞分裂次数成正比,该荧光信号可在488 nm 的激发光下进行检测,并可通过流式细胞仪进行分析。
参数信息
英文名称:5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester
中文名称:5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯
CAS NO:150347-59-4
分子式:C29H19NO11
分子量:557.46
熔点:152-154 °C
酸度系数(pKa):6.45(at 25℃)
状态:黄色粉末
Ex/Em:492/517nm
溶解性:溶于DMSO,DMF
纯度:≥95%
储存条件:-20℃避光干燥
使用方法
1.CFDA-SE 工作液的配制
(1)储备液的配制
取 1 mg CFDA-SE 溶于 0.1794 mL DMSO 中,得到 10 mM CFDA-SE。
注:原液建议 -20℃ 或 -80℃ 避光保存,避免反复冻融。
(2)CFDA-SE 工作液的配制
在无血清细胞培养中稀释原液
注意:请根据实际情况调整 CFDA-SE 工作液的浓度。
2.细胞染色
(1) 悬浮细胞:4℃,1000 g 离心 3-5 分钟,弃上清。PBS 洗涤 2 次,每次 5 分钟;贴壁细胞:弃去细胞培养基,加入胰蛋白酶解离细胞,制成单细胞悬液。4℃ 1000 g 离心 3-5 分钟,弃上清。PBS 洗涤 2 次,每次 5 分钟。
(2)加入 1 mL CFDA-SE 工作液,室温孵育 30 分钟。
(3)4℃,400 g 离心 3-4 分钟
(4)PBS 洗涤 2 次,每次 5 分钟。
(4)用无血清细胞培养基或 PBS 重悬细胞,荧光显微镜或流式细胞仪检测。
注意事项
(1)避光操作,全程避免光照以保护荧光基团;
(2)母液分装后-20℃冻存,避免反复冻融;
(3)科研或工业用途,不可用于临床诊断。