简要描述
DiOC6(3),是一种具细胞膜渗透性、发绿色荧光的亲脂性染料。作为一种膜探针,DiOC6 (3)在高浓度下能对活细胞和固定细胞的内质网(高尔基体)染色,也能对囊泡膜和线粒体染色。而在低浓度下,偏向选择性染色线粒体。
DiOC6(3)能用来标记活细胞。
神经元和酵母细胞中,DiOC6(3)曾用来研究内质网(ER)结构的相互作用和动力学;当染料浓度提高或在某些呼吸缺陷的酵母菌株内,DiOC6(3)能特异性染酵母核膜,而且具足够灵敏性来揭式核膜的变化。
参数信息
英文名称:3,3'-Dihexyloxacarbocyanine iodide (DiOC6(3) iodide)
中文名称:3,3′-二己基含氧碳菁碘代物
CAS NO:53213-82-4
分子式:C29H37IN2O2
分子量:572.52
熔点:219-221°C
密度:1.2837
酸度系数(pKa):
状态:红色粉末
Ex/Em:484/501nm(in methanol)
溶解性:溶于DMSO,DMF,无水乙醇,微溶于水
纯度:≥95%
储存条件:-20℃避光干燥
使用方法
【注意】以下使用方法仅用作参考,可根据具体的实验条件和具体的应用来做出调整。
1.染色液制备
(1)储存液制备:用 DMSO或无水乙醇配置浓度1~5 mM的储存液。例如,取10mg DiOC6(3)溶于3.49ml 无水DMSO中,溶解后得到5mM的储存液。
【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃,避免反复冻融,且要避光保存。
(2)工作液制备:用缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储存液,调整到1~5 μM的工作浓度。
【注意】:工作液终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来调整。
2.悬浮细胞染色
加入适当体积的染色工作液重悬细胞,使其密度为1×106/mL。
37℃孵育细胞2~20min,不同的细胞培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间。
孵育结束,按1000~1500 rpm离心5min。
去除上清液,之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
再重复3),4)步骤两次。
3.贴壁细胞染色
1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
2)从培养基中移走盖玻片,滤掉过量培养液,将盖玻片放在潮湿的小室内。
3)在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
4)37℃孵育细胞2~20min,不同的细胞培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间。
5)吸掉染色工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育5~10min,然后吸走培养基。
注意事项
荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。